PCR analiza: što je to? Kako da se PCR analizu

Video: Sjeme

Ne tako davno razvio pouzdanu, vrlo osjetljive i brza metoda za dijagnosticiranje raznih zaraznih bolesti kod ljudi. Takav postupak naziva se „PCR”. Što je to, što njegova suština, jer se može identificirati mikroorganizme i kako ga uzimati, mi ćemo opisati u ovom članku.

Povijest otkrića

On je izumio način Lančana reakcija polimeraze (PCR) Američki znanstvenik Cary Myullis u 1983. U početku, tvrtka patentirani dijagnostičke metode "Cetus Corporation"U kojoj je radio i njegov tvorac. No, 1992. sva prava i patenti su prodane "Hoffmann-La Roche", Nakon toga, ispostavilo se da su slični studija provedena paralelno i su prijavili drugi američkih biologa, kao što su Alice Chen, David Edgar, John rre. Godine 1980. sudjelovali u ovom pitanju i sovjetskih znanstvenika A. Slyusarenko A. Kaledin i S. Gorodeckog. Stoga, kako bi se utvrdilo je jedini vlasnik autorskih prava nije bilo moguće. Mnoge izvrsne biokemičara su doprinijeli razvoju metoda reakcije polimeraze i CERN patentirao svoje inovacije. U ovom trenutku analize PCR se provodi kroz posebno opremljenim laboratorijima.

SAŽETAK PCR dijagnostički

PCR analiza: što je to i kako se to radi? Suština metode je u tome da se pomoću posebnog enzima DNA polimeraze in vitro za povećanje volumena određenom mikroba okruženju. Da biste to učinili više puta višestruko dostupan DNK materijala. Dakle, prisutnost patogena u uzorku iznos će se povećati na račun biokemijske laboratorijske manipulacije i bakterije neće biti teško otkriti u mikroskopom.

Kako je proučavanje materijala?

Za provođenje analize potrebne:

• DNA predložak;
• početnice materijala povezuje krajeve fragment;
• Termostabilna DNA polimeraza enzim;
• kemikalije, osigurali pravilan rad enzima;
• pufer otopina, potrebna za stvaranje prikladne uvjete za rast i razvoj DNA materijala.

  

Izvođenje PCR djeluju 25-30 ponavljanja koji se sastoji od tri koraka: denaturiranje, žarenja i produljenja.

Analizirati pomoću lančane reakcije polimezarnoy poseban uređaj - cycler. Suvremena oprema omogućuje instaliranje potrebne za grijanje i hlađenje cjevËice program za uklanjanje pogrešaka za vrijeme postavljanja dijagnoze.

Gdje se prijaviti dijagnozu?

Postupak polimezarnoy lančana reakcija se koristi u različitim područjima medicine:

• Forenzička ga koristiti za identifikaciju genetskog materijala, kao što su sušilo, slina i krv
• PCR analiza krvi pomaže genotipizaciju npr za otkrivanje genetskih pojedinog zasađene odgovor određenog lijeka;
• metodom postavljena obiteljskim vezama između ljudi;
• najtraženiji PCR postupak je postao u medicinskoj dijagnostici za određivanje različitih infektivnih bolesti.

Što infekcija otkriva PCR?

Dakle, medicina je odavno uspješno koristi PCR analizu. Što je, već smo naučili. A neki uzročnici mogu otkriti s njim? PCR je dijagnosticiran nakon zarazne bolesti:

• hepatitis A, B, C;
• ureaplasmosis;
• kandidijaza;
• klamidija;
• mikoplazmoza;
• bakterijska vaginoza;
• ljubljenje bolest;
• trihomonijazu;
• HPV infekcija;
• tuberkuloze;
• herpes infekcije 1. i 2. vrste;
• Helicobacter pylori infekcije;
• citomegalovirus;
• difterije;
• salmoneloze;
• HIV infekcija.

  

Također, PCR metode se koriste u dijagnostici raka.

Prednosti postupka

Dijagnostički PCR ima nekoliko prednosti:

1. Visoka osjetljivost. Još samo nekoliko molekula DNA mikroorganizma PCR određuje prisutnost infekcije. To pomaže postupak kroničnih i latentne bolesti koje. Često se u takvim slučajevima, mikroorganizam je neobrađeno i na druge načine.
2. Kako bi se istražila bilo kojeg prikladnog materijala, kao što je krv, slinu, seksualne selekcije, kose, epitelnim stanicama. Najčešći je test krvi i urogenitalnog bris PCR.

   

3. Ne zahtijevaju proširenu rastuće kulture. Automatizirani proces dijagnostike omogućuje dobivanje rezultate istraživanja nakon 4-5 sati.
4. Metoda je gotovo u potpunosti autentičan. Snimljeno je samo izolirani slučajevi lažno negativnih rezultata.
5. Sposobnost prepoznavanja nekoliko vrsta patogena u jednom uzorku materijala. To ne samo da ubrzava proces dijagnosticiranja bolesti, ali i značajno smanjuje troškove materijala. Često, liječnik propisuje sveobuhvatne analize PCR. Cijena anketa, koji se sastoji od određivanja šest patogena, je oko 1500 rubalja.

Preporuke za pripremu za analizu

Rezultati važiti PCR studije trebaju biti testirani, slijedeći preporuke iz preliminarnih priprema za dijagnozu:

1. Prije dostavljanja sline trebao suzdržati od jedenja i lijek za 4 sata prije uzorkovanja materijala. Neposredno prije postupka, isprati usta s prokuhanu vodu.
2. Navedene pravila moraju biti vođeni i prilikom uzimanja uzorka s unutarnje strane obraza. Nakon ispiranja preporuča se provoditi lagane masaže na koži za oslobađanje prostate sekreta.
3. Urin je obično prikupljaju kod kuće. Da biste to učinili, morate provesti temeljitu WC u genitalije. U sterilnom plastičnom spremniku se prikupe 50-60 ml urina. Ona preporučuje za žene umetnuti tampon u rodnicu, a ljudi koliko je god moguće povući kožu puta kako bi se osigurala čistoća materijala. Ne možete uzeti materijal za vrijeme menstruacije.
4. Za isporuku sperme da se suzdrže od spolnog odnosa tijekom 3 dana prije uzimanja materijala. Također, liječnici su savjetovali da napusti korištenje saune i tople kupke, alkohola i začinjene hrane. 3 sata prije analize je potrebno da se suzdrže od mokrenja.
5. Proći urogenitalnog bris, na primjer, ako je analiza na klamidiju PCR, i žene i muškarci se preporučuje da se seksualni ostatak za 3 dana. 2 tjedna prije analize ne mogu uzeti antibiotike. Za tjedan dana morate prestati koristiti intimne gelove, masti, vaginalni čepići, ispiranje. 3 sata prije studiji trebali suzdržati od mokrenja. Tijekom menstruacija ograda materijal se ne provodi, samo tri dana nakon prestanka uočavanje može potrajati urogenitalnu bris.

PCR u trudnoći

Razdoblje čekanja za bebe, mnoge zarazne bolesti, spolno prenosive bolesti, su krajnje opasni za normalan razvoj fetusa. Spolno prenosive bolesti mogu potaknuti intrauterini razvoj, spontani pobačaj ili prijevremeni porod, kongenitalne malformacije djeteta. Dakle, važno je da se u ranoj trudnoći screening PCR. Pass analiza je potrebno prilikom prijave - do 12 tjedana.

Video: Dijagnoza HIV: ELISA, PCR, brzi test za HIV

Ograda materijal dolazi iz cervikalnog kanala s posebnim četkama. Postupak je bezbolan i ne predstavlja opasnost za bebu. Normalno vrijeme trudnoće analiziranog za klamidija PCR metode, kao i ureaplasmosis, mikoplazmoza, citomegalovirus, herpes, papiloma virusa. Kao ispitivanje Kompleks 6 PCR.

PCR za dijagnozu HIV

S obzirom na činjenicu da je metoda lančane reakcije polimeraze je vrlo osjetljiva na promjene u tijelu i uvjetima dijagnoze, mnogi faktori mogu utjecati na ishod. Stoga PCR analiza za infekciju HIV-om nije pouzdana metoda, njegova učinkovitost - 96-98%. Preostalih 2-4% od testa daje lažno pozitivne rezultate.

No, u nekim situacijama, bez PCR dijagnostiku HIV-a ne može učiniti. Obično se provodi za osobe s lažnim negativnih ELISA. Ovi podaci pokazuju da je osoba još nije razvila antitijela na virus i ne može se otkriti bez povećanja broja višestrukih. Da se to može postići provođenje PCR metoda ispitivanja krvi.

Isto tako potrebno je dijagnoza djece prve godine života, rođen HIV-pozitivnih majki. Metoda je jedini način da se pouzdano utvrditi status djeteta.

PCR za dijagnozu hepatitisa

Postupak polimeraza lančana reakcija omogućuje otkrivanje DNA virusa hepatitisa A, B, C, i prije stvaranja antitijela u infekcija ili simptoma početka. Posebno učinkovita je PCR na hepatitis C, budući da 85% takvih bolesti su asimptomatske i bez pravovremeno liječenje postaje kronična.

Video: Gdje se testirati ureaplasmosis?

Pravovremeno otkrivanje patogena će pomoći da se izbjegne komplikacije i dugotrajno liječenje.

PCR integrirani probir

Sveobuhvatna PCR analiza: što je to? Ovaj test metoda polimezarnoy lančane reakcije koja uključuje određivanje istovremeno nekoliko vrsta infekcija: Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Gardnerella vaginalis, candida, trichomonas, citomegalovirus, ureaplasmas urealitikum, herpes simplex tip 1 i 2, gonoreja, humani papiloma virus. Cijena ove dijagnoze kreće se od 2.000 do 3.500 rubalja. ovisno o klinici, materijala i opreme, kao i vrsti Analiza: kvalitativna ili kvantitativno. Ono što je potrebno u vašem slučaju - liječnik odluči. U nekim slučajevima, jednostavno otkrivanje prisutnosti patogena u drugima, kao što je HIV, važnu ulogu kvantitativnim testom. naziva „PCR analiza 12” u dijagnostici svih gore patogena ispitivanja.

Video: PCR - lančana reakcija polimeraze

Dešifriranju rezultate analize

Transkripcija PCR analiza je jednostavno. Postoje samo dvije indeks skale - „negativan” „pozitivan” i Nakon otkrivanja uzročnika može liječnici s 99% pouzdanosti th potvrditi prisustvo bolesti i započeti liječenje pacijenta. U kvantitativnom metodom određivanja infekcije u odgovarajući indeks stupca broja otkrivenih bakterija se navedeno. Samo liječnik može utvrditi opseg bolesti i propisati potrebno liječenje.

U nekim slučajevima, primjerice u određivanju HIV infekcije pomoću PCR, s negativnim rezultatom, postoji potreba za dodatnim istraživanjima kako bi potvrdili ove brojke.

Video: Dijagnoza klamidiju

Gdje se testirati?

Gdje prođe-PCR analize u javnom kliniku ili privatnom laboratoriju? Nažalost, u općinskoj medicinskim ustanovama opreme i metoda često zastarjeli. Stoga je bolje dati prednost privatnim laboratorijima s modernom opremom i visoko kvalificirano osoblje. Osim toga, u privatnoj klinici ne dobijete rezultate puno brže.

U Moskvi, mnogi privatni laboratoriji nude PCR analize za različite infekcije. Na primjer, u takvim klinikama kao „Vita”, „Integrirani Clinic”, „Sretna obitelj”, „Uro-Pro”, provedena PCR analizu. Cijena Anketa je 200 rubalja. za određivanje patogen.

Može se zaključiti da je dijagnoza zaraznih bolesti PCR-om u većini slučajeva je brz i pouzdan način za otkrivanje patogena u tijelu u ranim stadijima infekcije. Ipak, u nekim slučajevima, odabrati druge metode dijagnoze. Odrediti potrebu za takvom istraživanju može biti samo stručnjak. PCR analiza Dešifriranje zahtijeva profesionalni pristup. Slijedite liječničke savjete i ne daju svoje testove koje nisu potrebne.